Content area
Full text
Abstract
Sulfonamides exhibit their antitumor effects through multiple mechanisms including inhibition of membrane bound carbonic anhydrases, prevention of microtubule assembly, cell cycle arrest, and inhibition of angiogenesis. Here, sulfabenzamide's mechanisms of action on T-47D breast cancer cells were determined. Cells incubated with sulfabenzamide exhibited negligible levels of apoptosis, necrosis and cell cycle arrest when compared to untreated cells. These results were confirmed by morphological examinations, DNA fragmentation assays, flow cytometric and real time RT-PCR analysis. Surprisingly, despite negligible detection of DNA fragmentation, a considerable increase in caspase-3 activity was observed in cells incubated with sulfabenzamide. The increased expression ratio of DFF-45/DFF-40 indicated that caspase-3-related DNA fragmentation was blocked and apoptosis symptoms could not be seen. However, the effects of caspase-3 for PARP1 and DNA-PK deactivation resulted in autophagy induction. The overexpression of critical genes involved in autophagy, including ATG5, p53 and DRAM, indicated that in T-47D cells sulfabenzamide-induced antiproliferative effect was mainly exerted through induction of autophagy. Furthermore, downregulation of AKT1 and AKT2 as well as over expression of PTEN resulted in attenuation of AKT/mTOR survival pathway showing that death autophagy should be occurred in sulfabenzamide treatment.
Keywords: Sulfabenzamide, breast cancer, autophagy, apoptosis, p53.
Sülfobenzamid, T-47D meme kanseri hücrelerinde p53/DRAM yolagi araciligiyla otofajik hücre ölümünü tesvik eder
Sülfonamidler, membrana bagli karbonik anhidraz inhibisyonunu, mikrotubül toplanmasinin engellenmesini, hücre siklusunun durdurulmasini ve anjiyogenez inhibisyonunu içeren çoklu mekanizmalarla antitümör etkilerini göstermektedirler. Burada, T-47D meme kanser hücreleri üzerinde sülfobenzamid mekanizmasinin etkisi belirlenmistir. Sülfobenzamid ile inkübe edilen hücreler uygulama yapilmamis hücrelerle karsilastirildiklarinda önemsenmeyecek seviyede apoptoz, nekroz ve hücre siklusunun durmasini ortaya koymustur. Bu sonuçlar morfolojik incelemelerle, DNA fragmantasyon analizleriyle, flow sitometrik ve gerçek zamanli RT-PCR analizleriyle dogrulanmistir. Sasirtici bir sekilde, DNA fragmantasyonunun ihmal edilebilecek tespitine ragmen, sülfobenzamidle inkübe edilmis hücrelerde kaspaz 3 aktivitesinde dikkate deger bir artis gözlenmistir. DFF-45/ DFF-40' in artmis ekspresyon orani, kaspaz 3 ile iliskili DNA fragmantasyonunun durduruldugunu ve apoptoz belirtilerinin görülemeyecegini isaret etmektedir. Bununla birlikte PARP1 ve DNA-PK deaktivasyonu için kaspaz 3'ün etkileri otofaji indüklenmesiyle sonuçlanmaktadir. ATG5, p53 ve DRAM gibi otofajide yer alan kritik genlerin asiri ekspresyonu T-47D hücrelerinde sülfobenzamid-indüklenmis antiproliferatif etkinin çogunlukla otofaji indüksiyonu araciligiyla uygulandigini belirtmektedir. Ayrica, PTEN asiri ekspresyonu gibi AKT1 ve AKT''nin azalarak düzenlenmesi, otofaji ölümünün sülfobenzamid uygulamasiyla meydana geldigini gösteren AKT1/mTOR sag kalim yolaginin etkisinin azalmasiyla sonuçlanmaktadir.
Anahtar kelimeler:...