APLICACIÓN DE SALES DE TETRAZOLIO DE NUEVA GENERACION (XTT) PARA LA ESTIMACION DE LA DENSIDAD DE MICROORGANISMOS DEGRADADORES DE HIDROCARBUROS EN SUELOS DE LA ECORREGION CAFETERA COLOMBIANA

Abstract

El presente estudio evaluó el desempeño de dos sales de tetrazolio, una tradicional: INT y una de nueva generación: XTT, para estimar la densidad de microorganismos degradadores de hidrocarburos (HCs) en suelos empleando la técnica del Número Más Probable (NMP). Se analizaron 96 muestras de suelo con diferente historia de uso en la Ecorregión Cafetera de Colombia. Los microorganismos fueron recuperados en agar mínimo en atmósfera saturada de HCs y la capacidad degradadora fue confirmada por repiques sucesivos utilizando diesel como fuente de carbono. No se observaron diferencias en los recuentos de microorganismos degradadores obtenidos con las dos sales (t de Student, p<0,05), pero el XTT permitió mejor visualización de los pozos positivos dada la solubilidad del producto reducido, mientras que el INT produjo precipitación, debido al formazán insoluble generado, dificultando la lectura. Se obtuvo un mayor porcentaje de aislamientos empleando XTT (67%), lo cual podría indicar que el tipo de sal es determinante en la recuperación de estas bacterias. Adicionalmente, se evaluó el límite de detección celular, las condiciones óptimas de concentración de XTT y el tiempo de incubación necesario para la detección de actividad microbiana utilizando la cepa Acinetobacter sp. El aumento en la concentración de XTT de 0,5mM a 2mM y el tiempo tuvieron un efecto inhibitorio y favorable respectivamente, en la recuperación de células viables y el límite de detección de la técnica fue de 102 UFC/ml; la producción de XTT-formazán se relacionó positivamente con la concentración inicial de células y negativamente con el tiempo de incubación.