Testing for the ability to modify antibiotics of Panus tigrinus 8/18 Lentinus strigosus 1566 laccase

Abstract

Na biotecnología moderna, o uso de enzimas para obter compostos novos ou modificados com propriedades antibacterianas, antifúngicas e anticancerígenas é crucial. Lactases de cogumelos säo biocatalisadores promissores para síntese e modificaçâo de diferentes compostos, por serem enzimas baratas e disponíveis para a preparaçâo de componentes de reaçâo, e vem recebendo a devida atençâo recentemente. A purificaçâo da lacase foi realizada a partir do basidiomiceto Lentinus strigosus em varios estágios: Etapa 1 - na cromatografia de troca iónica em TEAE Servacell 23 (400 ml), foram observados dois picos de atividade da lacase distintamente separados, com eluiçâo do transportador a 0,21 e 0,27 M de NaCl. Para reduzir a perda de enzimas, todas as fraçoes com atividade de lacase foram coletadas, concentradas e dessalinizadas em uma célula de ultrafiltraçâo (Amicon, Estados Unidos) com membrana UM-10; Etapa 2 - a preparaçâo resultante com atividade de lacase foi aplicada a uma coluna Q-Sepharose (60 ml). Durante a eluiçâo, foram obtidos dois picos bem separados com atividade de lacase: lacase I (NaCl 0,12 M) e lacase II (NaCl 0,2 M); Etapa 3 - no decurso da purificaçâo adicional de ambas as enzimas, realizada no Recurso Q de transportador de troca aniónica (6 ml), um gradiente quebrado foi usado: 0-10%, 10-20% e 20-100% com NaCl 1M; Etapa 4 - tanto a lacase I como a lacase II, obtidas após o Recurso Q, foram dessalinizadas e concentradas para 1 ml cada e aplicadas a uma coluna de filtraçâo em gel Superdex 75. Como resultado, duas lacases foram obtidas de forma homogénea.

Alternate abstract:

In advanced biotechnology, the utilization of enzymes to achieve new or modified compounds with antibacterial, fungicidal, and anti-cancer specifications is crucial. Mushroom lactases are a hopeful biocatalyst for the synthesis and modification of different compounds. They are an accessible and inexpensive enzyme for the preparation of reaction objects and have recently received attention. Laccase purification was performed from basidiomycete Lentinus strigosus (LSJ in several stages: Stage 1. On ion-exchange chromatography on TEAE Servacell 23 (400 ml), two distinctly separated laccase activity peaks were observed, eluted from the carrier at 0.21 and 0.27 M NaCl. In order to reduce the loss of enzymes, all fractions with laccase activity were collected, concentrated, and desalted using an ultrafiltration cell (Amicon, United States) with a UM-10 membrane. Stage 2. The resulting preparation with laccase activity was applied to a Q-Sepharose column (60 ml). Two well-separated peaks with laccase activity were obtained during the elution: laccase I (0.12 M NaCl) and laccase II (0.2 M NaCl). Stage 3. In the course of further purification of both enzymes, carried out on anion-exchange carrier Resource Q (6 ml), a broken gradient was used: 0 - 10%, 10 - 20%, and 20 - 100% with 1M NaCl. Stage 4. Both laccase I and laccase II, obtained after Resource Q, were desalted, concentrated to 1 ml each, and applied to a Superdex 75 gel filtration column. As a result, two laccases were obtained in a homogeneous form.