Determination of bacterial endotoxins in normal intravenous human immunoglobulin on the replacement of rabbit pyrogen testing in Brazil

Abstract

Introduction: The normal intravenous human immunoglobulin is a sterile liquid or lyophilized preparation, with immunoglobulins, especially the immunoglobulin G (IgG). The National Institute for Quality Control in Health (NIQCH) performs analysis of biological products before being distributed to the population. The batches are subjected to physicochemical and biosafety assays. The rabbit pyrogen test (RPT) is a biosafety assay performed to check the contamination by agents that cause fever in the patient and, in cases of high concentration, can lead to death. Aim: To compare the results of RPT and bacterial endotoxins assays of ten samples. Methods: In RPT, both the product is injected into the rabbit’s marginal ear vein and the individual body temperature variations of the animals are evaluated. The bacterial endotoxin assay uses the kinetic chromogenic method, according to the Brazilian Pharmacopoeia and the international compendiums. Results: The tests of were plotted in a table for comparison. The tests coincided in 9 samples, except for a sample that presented bacterial endotoxin pyrogenicity. Conclusion: Bacterial endotoxin assay must be considered as an alternative method for animal tests.

Alternate abstract:

Introdução: a imunoglobulina humana intravenosa normal é uma preparação líquida estéril ou liofilizada, com imunoglobulinas, principalmente a imunoglobulina G (IgG). O Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde (INCQS) realiza análises de produtos biológicos antes de serem distribuídos à população. Os lotes são submetidos a ensaios físico-químicos e de segurança. O teste de pirogênio em coelhos (RPT) é um ensaio de segurança realizado para verificar a contaminação por agentes que causam febre no paciente e, em casos de alta concentração, podem levar ao óbito. Objetivo: comparar os resultados dos ensaios de RPT e endotoxinas bacterianas de onze amostras. Métodos: no RPT, o produto é injetado na veia marginal da orelha do coelho, e as variações de temperatura corporal individual dos animais são avaliadas. O ensaio de endotoxina bacteriana utiliza o método cromogênico cinético, de acordo com a Farmacopéia Brasileira e os compêndios internacionais. Resultados: os resultados dos ensaios foram plotados em uma tabela para comparação. Os testes coincidiram em 9 amostras, com exceção de 2 amostra que foram discrepantes na comparação entre os dois ensaios. Conclusão: o ensaio de endotoxina bacteriana deve ser considerado como um método alternativo para testes em animais.

Alternate abstract:

Introducción: la inmunoglobulina humana intravenosa normal es una preparación líquida o liofilizada estéril, con inmunoglobulinas, especialmente la inmunoglobulina G (IgG). El Instituto Nacional de Control de Calidad en Salud (INCQS) realiza análisis de productos biológicos antes de ser distribuidos a la población. Los lotes se someten a ensayos fisicoquímicos y de bioseguridad. La prueba de pirógenos en conejo (RPT) es un ensayo de bioseguridad que se realiza para verificar la contaminación por agentes que causan fiebre en el paciente y, en casos de alta concentración, pueden causar la muerte. Objetivo: comparar los resultados de los ensayos de RPT y endotoxinas bacterianas de diez muestras. Métodos: en RPT, el producto se inyecta en la vena marginal de la oreja del conejo y se evalúan las variaciones de temperatura corporal individual de los animales. El ensayo de endotoxinas bacterianas utiliza el método cromogénico cinético, de acuerdo con la Farmacopea Brasileña y los compendios internacionales. Resultados: las pruebas de se trazaron en una tabla para comparación. Las pruebas coincidieron en 9 muestras, excepto en una muestra que presentó pirogenicidad de endotoxina bacteriana. Conclusión: el ensayo de endotoxinas bacterianas debe considerarse como un método alternativo para las pruebas en animales.